Так, например, при обработке плазмы охлажденным (до 0`С) 8 10%-ным этанолом осаждается преимущественно фибриноген. Осаждение у- и 6-глобулинов происходит при повышении концентрации этанола до 25% (при 5`С). Белки, растворимые в 20%-ном этаноле, состоят из Bi-глобулинов, а в осадке содержатся у-глобули-ны, протромбин и другие протеолитические ферменты. В-Глобулины нерастворимы в 17%-ном этаноле при рН 5,2, тогда как у-глобулины остаются в этих условиях в растворе и осаждаются при увеличении ионной силы до 0,05. Осадок содержит большую часть антител.
Метод фракционирования белков с применением спирто-водных растворителей основан на различной растворимости белков в зависимости от ряда факторов: ионной силы (обусловливает силы взаимного притяжения и отталкивания и зависит от концентрации и валентности анионов и катионов соли), диэлектрической проницаемости, или диэлектрической постоянной (влияет на растворимость белков и диссоциацию солей в растворе), температуры (понижение температуры способствует уменьшению растворимости белков, что используется при осаждении), концентрации водородных ионов (влияет на растворимость белков плохая растворимость белка в изоэлект-рической точке используется для осаждения при фракционировании), концентрации белка (для наиболее полного осаждения существует оптимальная концентрация белка). Изменяя эти условия, выделяют из сыворотки крови отдельные белковые фракции.
Разделение белков плазмы с применением в качестве осадителя этилового спирта во избежание денатурации производят при низкой температуре. Спирт затем легко удаляют путем диализа или при высушивании белков в замороженном состоянии под вакуумом.
Метод дробного высаливания белков нейтральными селями нашел широкое применение благодаря своей простоте и доступности. Однако для получения большого количества белковых фракций он непригоден, так как на удаление солей путем диализа с применением антисептиков требуется много времени.
При исследованиях, а также при производстве препаратов часто возникает необходимость, выделить из плазмы крови отдельные белковые фракции. Основными методами их фракционирования являются дробное осаждение неорганическими солями, дробное осаждение с применением спирто-водных растворителей, разделение в элскт-рофоретических приборах.
Выделение и методы фракционирования белков плазмы
Биохимия и физиология питания
Выделение и методы фракционирования белков плазмы | Здоровье человека
Комментариев нет:
Отправить комментарий